1. Préparer l’identification de la paillette de Vitrification Haute Sécurité VHS en utilisant impérativement une étiquette dont l’encre et l’adhésif résistent à l’azote liquide. Mettre cette étiquette en place sur la paillette en la collant en regard de la zone où se trouvera le jonc coloré de préhension après introduction dans la paillette.

2. Pré-positionner l’introducteur bleu sur l’ensemble jonc-capillaire en faisant pénétrer son excroissance dans la lumière du jonc de préhension.

3. Exposer l’échantillon aux solutions de cryoprotecteurs selon le protocole du laboratoire en vigueur.

4. Déposer délicatement l’échantillon (maximum 2 ovocytes ou 2 embryons) à l’aide d’une micropipette à quelques millimètres de l’extrémité distale de la gouttière du capillaire. La goutte doit être la plus petite possible (<0,5µL).

5. Insérer immédiatement l’ensemble jonc-capillaire dans la paillette de Vitrification Haute Sécurité par son extrémité évasée jusqu’à ce que le corps de l’introducteur bleu butte sur l’extrémité évasée de la paillette.

6. Contraindre la paillette entre deux doigts ou les deux mors d’une pince afin de retirer l’introducteur.

7. Souder hermétiquement la paillette de Vitrification Haute Sécurité VHS à l’aide de la soudeuse SYMS, en veillant à bien maintenir la paillette à hauteur du jonc de préhension.

8. Après soudure, maintenir la paillette de Vitrification Haute Sécurité avec une pince au niveau de la zone du jonc de préhension.

9. La plonger verticalement, immédiatement (et non progressivement) dans un récipient (Thermos ou Dewar) rempli au préalable d’une quantité suffisante d’azote liquide.

10. Maintenir alors la paillette immergée pendant 60 secondes minimum tout en lui imprimant des mouvements rotatifs afin de prévenir la formation d´une couche isolante d’air qu’entraîne l’ébullition de l’azote liquide.

Décongélation

1. Préparer les bains de dilution.

2. Identifier la paillette de Vitrification Haute Sécurité recherchée, notamment par la couleur de son jonc de préhension et son étiquette.

3. L’extraire de son visotube à l’aide d’une pince, la plonger immédiatement dans un récipient (Thermos ou Dewar) contenant de l’azote liquide, puis transférer l’ensemble au plus près du premier bain de dilution.

4. Émerger la partie proximale de la paillette (zone du jonc de préhension et de l’étiquette) à l’aide d’une pince. La maintenir entre les deux mors de la pince en veillant à conserver l’extrémité distale (zone de la gouttière du capillaire et de l’échantillon) dans l’azote liquide.

5. Saisir fermement le Kit VHS entre 2 ou 3 doigts, positionner les lames des ciseaux dans la zone centrale du jonc coloré, et imprimer circulairement et successivement des incisions sur la paillette.
6. Lorsque la paillette est complètement sectionnée sur toute son épaisseur, sa partie inférieure tourne librement au dessous des ciseaux. Dès lors, les ciseaux se transforment en pince et permettent d’extraire l’ensemble jonc-capillaire en tirant dans l’axe de la paillette.
7. Plonger le plus rapidement possible (moins de 2 secondes) la gouttière du capillaire dans le premier bain de dilution.

Stockage en azote liquide

Le rangement et la gestion des paillettes CBS™ stockées en azote liquide sont assurés par l’utilisation des conditionnements proposés par Cryo Bio System.

Péremption

Trois ans à partir de la date de fabrication.

Références

Description

Conditionnement

019916

019917

019918

019919

019920

019921

Kit de Vitrification Haute Sécurité VHS
rouge
blanc
jaune
parme
bleu
vert

4

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